繼2017年(nián)12月(yuè)27日(rì)對(duì§✔×∏)抗體(tǐ)藥物(wù)基本情況及雜(zá)交瘤和(hé)單抗進行÷★£≥(xíng)總述後，本文(wén)接著(zhe)聊聊基因工(gōngδ•)程抗體(tǐ)相(xiàng)關情況。÷←

抗體(tǐ)藥物(wù)臨床應用(yòng→ ✘)面臨親和(hé)力不(bù)高(gāo)←¶、效應子(zǐ)功能(néng)單一(yī)等藥效學問(wè∑​n)題，體(tǐ)內(nèi)排出快(kuài)、難以到(dào<>)達靶部位等藥動學問(wèn)題，異源性強等毒理(lǐ)學問(π σ™wèn)題。20世紀80年(nián)代後期以來(láiε∑)，随著(zhe)分(fēn)子(zǐ)φ£σ生(shēng)物(wù)學的(de)迅速發展，人(•®§♠rén)們通(tōng)過基因工(gōng)程手段對(duì)天然分(fēn)₽©→子(zǐ)進行(xíng)人(rén)為(wèi)改造，使得(de)抗體(tπ‍™♠ǐ)具備更好(hǎo)的(de)藥效、更低(dī)的(de)毒性和(±₽hé)更适宜的(de)代謝(xiè)與分(fēn)布。

抗體(tǐ)藥物(wù)一(yī)百多(duō)年(n₽•ián)的(de)曆程，經曆了(le)從(cóng)最早的(de)多(du≈¶ō)克隆抗體(tǐ)到(dào)鼠單抗再到(dào•₹)基因工(gōng)程抗體(tǐ)的(de)過程₽™。鼠單抗能(néng)引起抗鼠單抗反應（HAMA反應），而HAMA反應有(∏€yǒu)約90%抗抗體(tǐ)是(shì)針對(duì  )鼠單抗C區(qū)的(de)。為(wèi)解決HAMA反應中最主要≈×'(yào)的(de)免疫原性成分(fēn)問(wèn)題，研究者☆₩↓∞采用(yòng)了(le)将鼠單克隆抗體(tǐ)C區(qū)替換為(wèi)人♣'ΩΩ(rén)單抗C區(qū)的(de)嵌合抗體(t‌ε€∞ǐ)策略。1984年(nián)，Morrison等報(bào)道(dào)了πφ>φ(le)第一(yī)個(gè)通(tōng‍<)過基因工(gōng)程方法構建的(de)人(r€→"én)鼠嵌合抗體(tǐ)。目前人(rén)→ ♦鼠嵌合抗體(tǐ)已經非常成熟且易于操作(zuò)，經典的(d÷±☆<e)人(rén)鼠嵌合單抗是(shì)将目标鼠單抗的(de)功能(n§‍★éng)性V區(qū)基因，經基因重組操作(zuò)與人♥≥γ(rén)IgG的(de)相(xiàng)應C區(↔©‌₹qū)基因相(xiàng)拼接，形成完整的(de)÷≤γ 人(rén)鼠嵌合抗體(tǐ)基因，通(tōng)過克隆入适宜的(de ↕)表達載體(tǐ)中，在哺乳動物(wù)細胞中表達。從(có♣• ng)1990年(nián)陸續開(kāi)展了(le&®↑§)一(yī)些(xiē)研究證實非人(rén)靈長(cháng)類動物(wù)π>抗體(tǐ)具有(yǒu)與人(rén)抗體(tǐ)相€φ(xiàng)近(jìn)的(de)特征。由于目前轉基因小(xiǎo)鼠¶↕ ≈尚不(bù)能(néng)夠全部模拟人(rén)抗體(tǐ)₽‍≈↔産生(shēng)的(de)全過程，人(rén)靈長(cháng)類嵌合抗體( ★tǐ)仍可(kě)以作(zuò)為(wèi£≠)全人(rén)抗體(tǐ)技(jì)術(shù)的(de)一(yī)個(↓♥↔ gè)有(yǒu)益補充。但(dàn)總的(de)↔≠₹¶來(lái)時(shí)，随著(zhe)人(rén)源化(₹γhuà)抗體(tǐ)、全人(rén)源抗體(tǐ)技(δ↔βjì)術(shù)的(de)發展成熟，嵌合單抗技(jì)β→♣術(shù)正逐漸邊緣化(huà)。

以人(rén)源化(huà)抗體(tǐ)、全人(rén)源化(huà)抗體(✘♥€βtǐ)為(wèi)代表的(de)是(shì)第二代基因工(gōng)程抗體♠‌ <(tǐ)。目前人(rén)們已經創建并完善了(le)以重構抗體(tǐ)、表面重α‌塑抗體(tǐ)、鏈替換抗體(tǐ)、去(qù)免疫化(huà)抗體(tǐ)等¥ ↔α為(wèi)代表的(de)多(duō)種人(rén)源化(₽‍↕huà)抗體(tǐ)技(jì)術(shù)，以降低(dī)抗體(tǐ)₽♠¥藥物(wù)發生(shēng)抗抗體(tǐ)反應的(de)可(kě)£☆能(néng)。抗體(tǐ)人(rén)源化(huà)技(jì)術(s>±←hù)使得(de)治療用(yòng)基因工(gōng)±•→程抗體(tǐ)免疫原性大(dà)大(dà)下(xià)降，但(dàn)&®∞即便是(shì)人(rén)源化(huà)程度很(hěn)高(gāo)的γ÷(de)人(rén)源化(huà)抗體(tǐ)，¥∞"依然有(yǒu)1%-5%的(de)異源÷≥成分(fēn)可(kě)能(néng)引起患者的(de$✔Ωλ)抗抗體(tǐ)反應，全人(rén)源抗體(tǐ)順勢而生(Ω★→shēng)。早在20世紀90年(nián)代，全人>₹(rén)源抗體(tǐ)就(jiù)開(kāi)始有(yǒu)了(le γ£)研究，目前已經形成了(le)以抗體(tǐ)庫技(jì)術(shù)、轉基'♥因小(xiǎo)鼠技(jì)術(shù)和(hé)轉染色體(tǐ≈₽)小(xiǎo)鼠技(jì)術(shù)這(zhè)3種制(zhì)備全人(r₩≈✘★én)源抗體(tǐ)的(de)代表性技(j$✘←ì)術(shù)。轉基因小(xiǎo)鼠制(zh™♣₹ì)備全人(rén)源抗體(tǐ)技(jì)♣£術(shù)是(shì)目前全人(rén)源抗體(tǐ)研究的(de)主流，轉∞π£©基因小(xiǎo)鼠技(jì)術(shù)的(de)關鍵在于轉基因δ¥小(xiǎo)鼠的(de)成功構建。轉基因小(xi‍©÷✔ǎo)鼠制(zhì)備全人(rén)源抗體(tǐ)，要(y₽¥ào)求人(rén)的(de)抗體(tǐ)基因片段在小(xiǎo)鼠體(tǐ)≠→內(nèi)必須進行(xíng)較為(wèi)有(yǒu)的(dεγ¶e)重排和(hé)表達，并且這(zhè)些(xiē)片段能(néng× §×)與小(xiǎo)鼠細胞的(de)免疫系統信号機←§π(jī)制(zhì)互相(xiàng)作(zuò∏♥↑★)用(yòng)，使得(de)小(xiǎo)鼠都(dōu)在受抗原刺激後，這↓©✔(zhè)些(xiē)人(rén)抗體(←₩♠‍tǐ)基因片段能(néng)被選擇、表達并活化(huà)B細胞分(fēn)泌φ€人(rén)抗體(tǐ)。目前轉基因小(xiǎo)鼠制(zhì)備全人(ré"≈n)源抗體(tǐ)技(jì)術(shù)已經形成若幹技(jì)術(shù™↓​)平台，最主要(yào)的(de)有(yǒu)2個(gè♣←®™)：XenoMouse平台和(hé)UltiMAb平台。♦α∑從(cóng)親和(hé)力的(de)角度來(lá"σi)看(kàn)，大(dà)部分(fēn)通(tōng)過轉基因小(xi←δ≈☆ǎo)鼠獲得(de)的(de)全人(rén)源單抗親和(h$≠‌é)力在0.1~10nmol/L的(de)範圍內(nèi)，也(yě÷σ₽)有(yǒu)部分(fēn)轉基因小(xiǎo)鼠産生(shēng)的(₩↓♦"de)全人(rén)源單抗能(néng)達到​≈δ(dào)1pmol/L甚至更高(gāo)（抗體(tǐ)的(de)親和(hé)‍>✔力是(shì)指抗原與抗體(tǐ)結合的↔®(de)牢固程度。親和(hé)力越大(dà)表示抗體(tǐ)的(de)結合¶€♠反應越快(kuài)，抗原抗體(tǐ)複合物(wù)越不(™σ₹bù)易解離(lí)。親和(hé)力的(de)大(dà)小(xiǎo)是(s¶‌hì)由分(fēn)子(zǐ)的(de)大(dà)小(xiǎo)、抗↕₽φ體(tǐ)結合的(de)位點、以及抗原決定簇之間(jiān)的(de)™≠♦立體(tǐ)構型的(de)适合程度決定的(de♣<±)。）。從(cóng)效能(néng)、經濟性等方面來(‌πβ≥lái)看(kàn)，轉基因小(xiǎo)鼠制(zhì)"α≤₩備全人(rén)源單抗要(yào)優于其✘∏α他(tā)生(shēng)産全人(rén)源單抗的(de)技(jì)術(≥∏shù)。

目前，人(rén)源化(huà)、小(xiǎo)型化(∑ε★¶huà)、功能(néng)化(huà)正成為(≈↑αwèi)基因工(gōng)程抗體(tǐ)藥物(wù)的(→ ×de)三大(dà)主要(yào)發展趨勢。小(xiǎo)分(fēn)子ε↑(zǐ)抗體(tǐ)（或稱小(xiǎo)型化(huà)抗體(tǐ)）₹≥采用(yòng)完整抗體(tǐ)分(fēn)子(zǐ)中的₽÷β(de)抗原結合位點序列，可(kě)構建成分(fēn)子(zǐ)量較小φ ®(xiǎo)且具有(yǒu)抗原結合活性的(de)新型分(fēn)子(zǐ)§ε≥≤或片段。小(xiǎo)分(fēn)子(zǐ)抗體(tǐ)具有(yǒu)免疫<δ原性低(dī)、分(fēn)子(zǐ)量小(xiǎo ♣)穿透性強易于深入組織、半衰期短(duǎn)易于清除、不(₽ σbù)與Fc受體(tǐ)陽性細胞結合、靶向性好(hǎo)、易于'≈<$基因工(gōng)程操作(zuò)賦予其新功能(néα↕α§ng)、可(kě)在原核細胞表達生(shēng)産成本降低(dī)等優點。∞α對(duì)于擁有(yǒu)2個(gè)不(bù)同♦λ的(de)抗原結合位點的(de)稱為(wèi)雙₽‌→ 特異性抗體(tǐ)（也(yě)稱雙功能(néng÷♦₹)抗體(tǐ)），其可(kě)以同時(shí)與兩個(<↕gè)靶抗原結合，在發揮抗體(tǐ)靶向性的(±®÷ de)同時(shí)，介導另外(wài)一(yī)種特殊功能(néng∏$)的(de)作(zuò)用(yòng)。

通(tōng)過各種基因工(gōng)程手段，人(rén)↕ 們可(kě)以賦予抗體(tǐ)分(fēn)子±₽(zǐ)除了(le)與抗原結合之外(wài)的(de)其他(t≈ε✔σā)新的(de)功能(néng)，從(có‍α$€ng)而更好(hǎo)地(dì)發揮各種治療作(zuò)用(yòng)，這≠¥✔✘(zhè)便産生(shēng)了(le)第三代∑÷≥基因工(gōng)程抗體(tǐ)藥物(wù)。例如(rú)1）胞內(nè&γ™↕i)抗體(tǐ)，指在細胞內(nèi)合成并作($♠Ω±zuò)用(yòng)于細胞內(nèi)抗原組分(fēn)的(de)抗體('∞‌£tǐ)；2）抗體(tǐ)融合蛋白(bái)，将各式≈‍♥各樣的(de)基因工(gōng)程抗體(tǐ)分(fēn)子(zǐ)與→¥₹其他(tā)具有(yǒu)特定功能(néng)的(✘Ω®‍de)蛋白(bái)或多(duō)肽融合，将賦予抗體(tǐ)分(f✔'♥ ēn)子(zǐ)以所融合的(de)效應分(&₹&₩fēn)子(zǐ)所帶來(lái)的(de)新的(de)功能(nλ¥✘éng)。3）抗體(tǐ)酶，指具有(yǒu)♥>催化(huà)活性的(de)抗體(tǐ)，不(bù)僅能(né ®≈¥ng)與抗原結合，還(hái)能(néng)同時(shí)起到(dào)×"&催化(huà)相(xiàng)關分(fēn)子(zǐ>‍↕)發生(shēng)化(huà)學反應的(de)>±↑作(zuò)用(yòng)；4）抗原化(huà)抗δ &體(tǐ)等。

在選擇疾病合适的(de)抗體(tǐ)藥物(wù)作(zuò)用♥β∏™(yòng)靶點、治療機(jī)制(zhì)以及λ↑構建制(zhì)備能(néng)與靶點特異性結合且免疫原性小(xiǎo)的(d★ ​e)基因工(gōng)程抗體(tǐ)後，作(zuò)為(wèi&"&)一(yī)種生(shēng)物(wù)藥，還(hái)應該能(↓↔λnéng)夠經濟地(dì)大(dà)規模生(sh₩‍₩ēng)産出質量合格、穩定的(de)産品，并最大(dà)限≈↑ ↕度地(dì)提高(gāo)其臨床藥效學作(zuò)用(yò₽ £ng)、降低(dī)其毒副作(zuò)用(yòng)，這(zhè)便需要(y> ☆ào)對(duì)基因工(gōng)程抗體(₹βtǐ)做(zuò)進一(yī)步地(dì)改造。

抗體(tǐ)的(de)可(kě)變區(qū)是(shì)負責特σ₩¶®異性識别抗原并與之結合的(de)功能(néng)性區(qū)域，通(tōng)♦∑過對(duì)其後期改造可(kě)進一(y∏φ↑↔ī)步提高(gāo)基因抗體(tǐ)藥物±Ω©(wù)在藥學、藥理(lǐ)學、藥動學、毒理(lǐ)學∑§等方面的(de)多(duō)種性能(néng)和(hé)适應性。藥學≈∞¶±性能(néng)的(de)問(wèn)題主要("↑∞yào)指基因工(gōng)程抗體(tǐ)✘™在分(fēn)子(zǐ)結構上(shàng)不(bù)夠完善，與具有(yǒu) π↑​天然結構的(de)抗體(tǐ)分(fēn)子(£₽>zǐ)相(xiàng)比穩定性差（通(tōng)常包括熱(rè)'​ π穩定性和(hé)化(huà)學穩定性）。适當提高(××gāo)基因工(gōng)程抗體(tǐ)藥物(wù)的(dσ§☆←e)親和(hé)力不(bù)僅可(kě)以增強其藥效，還(h©∏ái)能(néng)減少(shǎo)用(yòng)量，部分(fēn)提高(g$★ •āo)其靶向分(fēn)布的(de)性能(nén✘≥€§g)。對(duì)于多(duō)數(shù)λ‌基因工(gōng)程抗體(tǐ)藥物(wù)的(de±δσΩ)作(zuò)用(yòng)機(jī)制(zhì)來(l≈¶£↔ái)說(shuō)，增強親和(hé)力均能(néng)增強抗體(t↔§‍ǐ)的(de)藥效學作(zuò)用(yòng)。通(tōng)過不(bù☆∑)同機(jī)制(zhì)可(kě)以使得(d>∏e)抗體(tǐ)免于溶酶體(tǐ)的(de)降解，從☆™$(cóng)而提高(gāo)藥動學性能(néng)。基因工(g¥→‍βōng)程抗體(tǐ)藥物(wù)用(yòng)治療時(shí)的(dδ©e)毒副作(zuò)用(yòng)一(yī)般來(₩>πlái)源于3個(gè)方面：1）因抗體(tǐ)的(de)免 ✔疫原性引起的(de)抗抗體(tǐ)反應；2）因‍<✔γ抗體(tǐ)的(de)交叉反應引起的(de)正₹¶≈≈常組織或細胞的(de)損傷；3）部分(fēn)正常組織或細胞 ∑↔因低(dī)水(shuǐ)平表達靶抗原而受到(dào₹♣)抗體(tǐ)的(de)損傷。前兩類因素可(kě)以通'&↑♠(tōng)過基因工(gōng)程抗體(tǐ)的(de)進一(yī)步 "改造來(lái)降低(dī)其殘存的(de)>♠免疫原性和(hé)消除與其他(tā)抗原的(de)交叉反↔÷應（第三類是(shì)因為(wèi)靶抗原的(de)選擇問(wèn)題造成♥₩的(de)，隻能(néng)通(tōng)過控←δ制(zhì)合适的(de)藥物(wù)濃度÷§來(lái)實現(xiàn)患者的(de)最大(Ω★dà)收益）。

通(tōng)過改造Fc段所介導的(de)各種功能(néng)，将很®₩(hěn)可(kě)能(néng)有(yǒu)助于提高→δ​(gāo)抗體(tǐ)藥物(wù)的(de)療效。Fc介導的(de)功能(né ​♦♣ng)主要(yào)有(yǒu)ADCC、CDC和(hé)FcRn介導₽✔✔∞的(de)抗體(tǐ)的(de)儲藏和(hé)代謝(xiè)。φ♣多(duō)種方法已經被用(yòng)于Fc的(d®≈e)改造，目前主要(yào)的(de)技(j ©γì)術(shù)手段是(shì)通(tōng)過"Ω替換相(xiàng)關殘基和(hé)修飾寡糖結構×÷來(lái)進行(xíng)。

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